A. phagocytophilum: A nested PCR wa

A. phagocytophilum: A nested PCR was carried out using the primers GE3a and GE10r for the primary reaction which amplifies a 932 bp fragment of the 16S rRNA gene of A. phagocytophilum, and the primers GE9f and GE2 for the secondary assay, which amplified a 546 bp fragment of the same gene [6].

Bartonella spp.: DNA samples were employed in a PCR assay to identify the Bartonella genus. The primers p24E and p12B, previously described by Relman et al. (1990) [7], were used in this protocol to amplify a 296 bp fragment of the Bartonella 16S rRNA gene.

B. burgdorferi s.l.: Primers JS1 and JS2 were used to amplify a 261 bp fragment of the 23S rRNA gene of B. burgdorferi s.l. [8].

C. burnetii: C. burnetii was identified by amplifying a 687 bp fragment of the IS1111a gene using primers Trans-1 and Trans-2 as described by Berri et al. (2009) [3].

Rickettsia spp.: PCR with the primers Rr190.70p and Rr190.701 were carried out to amplify a 632 bp fragment of the gene encoding the outer surface protein ompA of Rickettsia spp. as described by Roux et al. (1996) [9]. Since this protocol does not allow detecting Rickettsia helvetica, Rickettsia akari, Rickettsia australis, and Rickettsia bellii, a second PCR assay was performed using the primers RpCS.877p and RpCS.1258n which amplify a 381 bp fragment of the gltA gene [10].

All the amplification products were analyzed by electrophoresis on 1.5% agarose gel at 100 V for 45 min; gel was stained with ethidium bromide and observed. GelPilot 100 bp Plus Ladder (Qiagen) was used as DNA marker.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

A. phagocytophilum: ซ้อนกัน PCR ได้ดำเนินการโดยใช้ไพรเมอร์และ GE3a GE10r สำหรับปฏิกิริยาหลักซึ่งส่วนขยาย 932 bp ของยีน 16S rRNA ของเอ phagocytophilum และไพรเมอร์และ GE9f GE2 สำหรับการทดสอบรองซึ่งขยาย 546 bp ส่วนของยีนเดียวกัน [6]. Bartonella spp. ตัวอย่างดีเอ็นเอที่ถูกว่าจ้างในการทดสอบ PCR เพื่อระบุประเภท Bartonella ไพรเมอร์และ p24E p12B อธิบายก่อนหน้านี้โดย Relman et al, (1990) [7] ถูกนำมาใช้เพื่อขยายส่วน 296 bp ในพิธีสารนี้ 16s rRNA ยีนของ Bartonella. บี burgdorferi T: ไพรเมอร์ถูกนำมาใช้ในการขยาย 261 bp JS1 และ JS2 ส่วนของยีน 23S rRNA ของ B. burgdorferi T [8]. ซี burnetii: ซี burnetii ถูกระบุโดยขยายส่วน 687 bp ของยีน IS1111a โดยใช้ไพรเมอร์ Trans-1 และทรานส์ 2 ตามที่อธิบาย Berri et al, (2009) [3]. spp Rickettsia:. PCR ได้ดำเนินการกับไพรเมอร์เพื่อขยาย Rr190701 Rr19070p และชิ้นส่วน 632 bp ของยีนเข้ารหัสโปรตีนพื้นผิวด้านนอกของ ompa Rickettsia เอสพีพี ตามที่อธิบาย Roux, et al (1996) [9] เนื่องจากโปรโตคอลนี้ไม่อนุญาตให้มีการตรวจสอบ Rickettsia Helvetica, Rickettsia Akari, Australis Rickettsia และ Rickettsia bellii ที่สอง PCR การทดสอบได้รับการดำเนินการโดยใช้ไพรเมอร์และ RpCS.877p RpCS.1258n ซึ่งขยายส่วน 381 bp ของยีน gltA [10] ผลิตภัณฑ์ทั้งหมดขยายมาวิเคราะห์โดย electrophoresis บน agarose gel ที่ 1.5% ที่ 100 V สำหรับ 45 นาที; เจลถูกย้อมด้วย ethidium bromide และตั้งข้อสังเกต GelPilot 100 bp พลัสบันได (Qiagen) ถูกนำมาใช้เป็นเครื่องหมายดีเอ็นเอ